CONFECÇÃO DE PRIMERS PARA O GENE DA METALOPROTEINASE - 2 (MMP-2) PARA REALIZAÇÃO DE METODOLOGIA DE PCR EM TEMPO REAL

Resumo

Introdução: O câncer de mama (CM) é o segundo tipo de câncer mais frequente entre as mulheres, sendo responsável por 66.280 novos casos no ano passado. Biomarcadores são parâmetros biológicos que refletem desequilíbrios moleculares provenientes de patologias, colaborando com exames laboratoriais. A metaloproteinase de matriz 2 (MMP-2) é uma enzima que digere a matriz extracelular e responde à alterações moleculares, sendo que em células cancerígenas sua expressão é aumentada. Sua  presença no soro e tecido de pacientes com câncer mamário pode indicar invasão tumoral. Objetivos: Confeccionar primers para detecção da expressão de MMP-2 em linhagem de células tumorais de mama. Materiais e métodos: A partir de  levantamento bibliográfico no GenBank do gene da MMP-2 humana foram confeccionados primers para a realização da metodologia de PCR em tempo real. Os softwares IDT e Primer 3 foram os escolhidos para confecção dos primers forward e reverse. Após a confecção, os primers  foram avaliados quanto aos parâmetros de reação e afinidade pelo gene alvo utilizando as plataformas Clustal Omega, IDT Tools e BLAST, para obtenção do melhor par de primers. Resultados: Foram confeccionados 5 pares de primers para MMP-2 e, após avaliação, foi selecionado o par de primers a seguir: GCAGCTCCTTACCAACCAGT e GGGGAGAGAGGGAAGGATGT. Conclusão: A etapa de confecção de primers é importante, pois  a simulação em computador muitas vezes acaba se demonstrando diferente da reação in vitro. Portanto, quanto mais rigor na avaliação dos parâmetros de reação, maior chance de se obter um par de primers que apresente bom desempenho nas reações, poupando perda de tempo e de reagentes. A partir da confecção dos primers realizada neste trabalho, espera-se que os mesmo apresentem sensibilidade e especificidade suficientes para garantir que o produto formado durante a amplificação seja realmente a sequência esperada, confirmando que a etapa de confecção foi conduzida adequadamente.