EXPRESSÃO DE RANK-RANKL-OPG NA DIFERENCIAÇÃO DE CÉLULAS MUSCULARES ESQUELÉTICAS

Resumo

Introdução: O sistema RANK-RANKL-OPG é constituído pelo receptor RANK, o ligante RANKL e o receptor solúvel Osteoprotegerina (OPG). Esse sistema tem importante papel na regulação de processos fundamentais ao tecido ósseo, como a remodelação óssea. A literatura descreve o papel da via de sinalização RANK-RANKL na regulação da atividade de retículos sarcoplasmáticos no tecido muscular, bem como a participação de OPG na redução de fraqueza muscular e restauração de fibras em casos de distrofia muscular em camundongos. Dessa forma, destaca-se a relevância de estudos sobre a unidade osso-músculo e a atividade de proteínas solúveis na comunicação e homeostase desses tecidos. Objetivo: Verificar a expressão de RANK-RANKL-OPG ao longo do processo de diferenciação de miotubos in vitro. Materiais e Métodos: A linhagem de mioblastos C2C12 foi cultivada em meio DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino, 100U/ml de penicilina e 100 μg/ml de estreptomicina em estufa a 37ºC e 5% de CO₂. A diferenciação em miotubos foi realizada durante cinco dias em DMEM suplementado com 2% soro equino. Estímulos com RANKL foram realizados ao longo da diferenciação, renovados a cada 48h. A análise da expressão gênica e proteica de RANK, RANKL e OPG foram realizadas por RT-qPCR utilizando o kit QuantiFast SYBR^® Green (Qiagen^®) e western blot, respectivamente. A dosagem de RANKL e OPG no sobrenadante foi realizada pelo kit ELISA Kit (R&D Systems^®). Resultados: A expressão proteica de RANK e OPG aumentou, destacando-se a maior expressão de OPG no terceiro dia de diferenciação. Observamos um aumento significativo de OPG no sobrenadante de células no 3º dia de diferenciação, enquanto RANKL foi indetectado. Além do aumento na expressão gênica de OPG, houve aumento na expressão de MyoD e MF20, fundamentais para a diferenciação de miotubos. Conclusão: Os resultados sugerem a ação de RANKL na indução da diferenciação de miotubos e também apontam que RANKL pode atuar como uma osteocina na regulação do músculo esquelético e este, por sua vez, pode regular este estímulo por meio da expressão de OPG. Assim, estes dados preliminares indicam um papel inédito da sinalização RANK-RANKL-OPG em processos fisiológicos da fibra muscular esquelética.