SUPLEMENTAÇÃO NUTRICIONAL PARA OBTENÇÃO DE ANTICORPO MONOCLONAL MURINO ANTI-PBP2A DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS RESISTENTE À METICILINA (MRSA) EM HIBRIDOMAS

Resumo

Introdução: Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) é um dos principais patógenos envolvidos em infecções nosocomiais, levando a altas taxas de morbidade e mortalidade em hospitais em todo o mundo. O anti-PBP2a é um anticorpo monoclonal (mAb) contra uma proteína de superfície do MRSA. Este mAb é produzido em sistemas de cultura de células animais, usando linhagem de células de hibridoma. A suplementação do meio de cultivo com componentes variados para o metabolismo celular está associada ao aumento da densidade celular e à obtenção do produto de interesse com qualidade. Objetivos: Estudar o aumento da produção do anticorpo monoclonal anti-PBP2a secretado por células de hibridoma. Materiais e métodos: Seis suplementos nutricionais comerciais, chamados de Cell Boosters (CB1, CB2, CB3, CB4, CB5 e CB6 / Cytiva®), foram preparados na concentração 10g/L em Meio Dulbecco MEM (DMEM) acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB). As células foram preservadas em nitrogênio líquido a -196°C.  Após o descongelamento, foram cultivadas em frascos T25 cm2 contendo DMEM com 10% (v/v) SFB, volume de trabalho 5 mL, 2 mM Glutamina e mantidas a 37°C em atmosfera úmida de 5% CO2. Para os experimentos, os Cell Boosters foram inoculados em 10% (v/v) no dia 0 das culturas celulares. A quantificação do mAb anti-PBP2a foi realizada por imunoensaio enzimático direto (ELISA). Resultados: No final de cada cinética, verificou-se a concentração de anticorpos monoclonais do controle (42,5ug/mL) e dos suplementos CB3, CB5 e CB6 (55,2ug/mL, 49,9ug/mL e 51,6ug/mL), indicando um aumento de cerca de 30%, 17,5% e 21,5% na produção de mAb, respectivamente. Conclusão:  Os suplementos 3, 5 e 6 aumentaram a produção do mAb, no entanto, o CB3 é mais relevante para melhorar a proliferação celular e concentração anti-PBP2a, principalmente.